AAV病毒包装是基因治疗和基因编辑领域的重要技术，其核心目的是将目标基因插入腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）基因组中，从而生成携带目标基因的重组AAV病毒颗粒。这一过程涉及多个步骤，包括构建AAV载体、转染包装细胞、病毒颗粒的收集与纯化等。

1. 构建AAV载体
   首先需要将目的基因插入到AAV载体中。常用的AAV载体包括pAAV系列，其包含两个倒置重复序列（ITR），用于基因复制和包装。此外，还需要构建辅助质粒，如包含Cap基因（编码衣壳蛋白）和Rep基因（参与病毒复制）的质粒

2. 转染包装细胞
   将构建好的AAV载体质粒和辅助质粒共转染到包装细胞中，常用的包装细胞系包括HEK293T细胞或AAV-293细胞。这些细胞能够高效表达所需的病毒蛋白，并完成病毒颗粒的组装和释放

3. 病毒颗粒的收集与纯化
   在转染后48-72小时，收集培养基上清液或通过裂解细胞提取病毒颗粒。随后，利用密度梯度离心、PEG沉淀或层析纯化等方法分离和纯化病毒颗粒。纯化后的病毒颗粒需要经过滴度测定（如qPCR或ELISA）以确保其质量和纯度

4. 质量控制
   纯化后的病毒颗粒需进行多重酶切质粒鉴定、SDS-PAGE检测以及qPCR滴度测定，以验证其基因组完整性和感染效率

5. 病毒储存
   纯化的AAV病毒颗粒可储存在4°C或-80°C下，避免反复冻融，以延长其稳定性

6. 注意事项

• 使用成熟的商业化质粒载体系统，避免使用来源不明的质粒。
• 注意细胞密度和活力对病毒包装效率的影响。
• 确保包装过程中无辅助病毒残留，以提高安全性

     AAV病毒包装具有以下优点：

• 安全性高：重组AAV系统去除了大部分野生型AAV基因组元件，降低了潜在毒性。
• 免疫原性低：AAV感染引起的免疫反应较弱，适合长期表达。
• 宿主范围广：能感染分裂和非分裂细胞，适用于多种组织和器官

1. 常用细胞系推荐

• HEK293系列（如HEK293T/HEK293）：
  这是最广泛使用的选择。它们天然表达腺病毒的E1基因（支持辅助功能），且对化学/电穿孔转染效率高。其中HEK293T因含有SV40大T抗原可增强质粒复制能力。
• 其他工程化衍生株（如稳定表达Rep/Cap的克隆）：
  适用于规模化生产。例如通过“双剪接开关”策略调控Rep蛋白表达的稳转株可避免毒性并提高产量。

2. 选择依据

• 兼容性：
• AAV血清型与衣壳蛋白（Cap）需匹配目标组织。例如肝靶向常用HEK293+血清型8。
• 若使用辅助质粒（如pHelper），需确保宿主缺乏相关功能（如E1缺失时依赖HEK293补足）。
  • 效率与稳定性：
• HEK293系列通常提供高滴度（>10⁵ VP/细胞）；稳转株适合长期生产但需优化筛选条件。
  • 安全性要求：
• HEK293可完全避免辅助腺病毒的污染；若需临床级生产需符合GMP标准。

3. 注意事项

• 状态控制：
• 保持80-90%融合度及高活力；培养基需含高质量血清